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關(guān)于超濾管的常見問(wèn)題與解答
Q:超濾管的膜材質(zhì)是什么?
A:超濾管的膜材質(zhì)為密理博的Ultracel再生纖維素膜,生產(chǎn)工藝嚴(yán)格,截留分子量明確而準(zhǔn), 蛋白吸附損失小。
Q:如果要用超濾的方法分離兩種蛋白,那么這兩個(gè)蛋白的大小需要相差多少?
A:按照經(jīng)驗(yàn),建議兩個(gè)蛋白的分子量要相差 一個(gè)數(shù)量級(jí)(10倍)。
Q:超濾管可以用酒精消毒滅菌么?
A: 超濾管與70%乙醇是兼容的,但是對(duì)滅菌處理的具體方法沒(méi)有做相關(guān)的測(cè)試,所以無(wú)法提供更進(jìn)一步的參考信息。
Q:超濾裝置是否可以用于高壓滅菌?
A: 超濾管都是采用熱封設(shè)計(jì),不可以用高壓高溫滅菌。
Q:蛋白在濃縮時(shí)出現(xiàn)了沉淀,如何改進(jìn)?
A:蛋白如果濃縮過(guò)快或者過(guò)度濃縮都有可能引起蛋白沉淀。建議蛋白濃縮后的 濃度不超過(guò)20mg/ml.對(duì)于對(duì)濃縮速度敏感而容易沉淀的蛋白,建議的改進(jìn)方法是:
1)離心力降為推薦離心力的30%-50%
2)改用截留分子量大的超濾管(如原本選用10k,此時(shí)可以選擇30k)
3)在濃縮過(guò)程中取出超濾管, 用吸頭反復(fù)吹吸幾次后再繼續(xù)濃縮
Q:濃縮后發(fā)現(xiàn)濃縮液中沒(méi)有目的蛋白,可能的原因有哪些?
A:首先,超濾管的蛋白起始濃度為25ug/ml.請(qǐng)確保樣本的起始濃度大于這個(gè)濃度。其次,如果問(wèn)題仍然出現(xiàn),請(qǐng)不要丟棄樣本濾過(guò)液以便用于分析可能的原因:
1)如果目的樣本在濾過(guò)液中,那么請(qǐng)排查: .
a)是否選擇了合適截留分子量的超濾管(目的蛋白分子量的1/2或者1/3)?
b)使用的離心力是否是在限定范圍內(nèi)?如果使用的是rpm,請(qǐng)換算成相應(yīng)的g離心力,具體換算方
法請(qǐng)垂詢。
c) 離心機(jī)最近是否有校準(zhǔn)過(guò)?
Q:有時(shí)候用超濾離心管連水都離不下來(lái),可能是什么原因?
A:超濾膜中含有微量甘油。如果出現(xiàn)這種情況,請(qǐng)先用0.1 N NaOH清洗再離心。最后用緩沖液或Milli-Q@水再次清洗后甩干。清洗后的濾膜應(yīng)立即使用,如暫時(shí)不用,請(qǐng)保持潤(rùn)濕狀態(tài),避免重新干燥。
注意事項(xiàng)
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本試劑僅供實(shí)驗(yàn)室研究使用
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